982 resultados para Lectinas de Ligação a Manose
Resumo:
A leishmaniose visceral (LV) ou calazar uma doena endmica, crnica, grave e de alta letalidade se no tratada. Os estudos apontam a protena Lectina Ligante de Manose (MBL), codificada pelo gene MBL2, como uma pea-chave na imunidade inata, dada a sua funo no reconhecimento microbiano, na eliminao, inflamao e morte celular. Neste trabalho realizamos um estudo do tipo caso-controle que teve como objetivo investigar a associao entre variantes no gene MBL2 e a suscetibilidade LV em indivduos residentes em reas endmicas da Ilha de So Lus-MA. A amostra foi constituda por 322 indivduos, sendo 161 casos com LV, no aparentados, de ambos os sexos, residentes em reas endmicas da doena na Ilha de So Lus e 161 controles saudveis, no infectados e no aparentados da mesma regio. A identificao dos casos de LV se deu por meio do contato constante com os principais hospitais e ambulatrios de referncia para a doena na cidade. Tambm foram feitas buscas de pacientes com LV em ambiente domiciliar, a partir de registros da FUNASA-MA. A anlise molecular consistiu na genotipagem de 6 variantes localizadas na regio promotora [posies -550 (C>G), -221(G>C), +4(C>T)] e codificadora [cdons 52 (C>T), 54 (G>A) e 57 (G>A)] do gene MBL2, atravs da reao em cadeia da polimerase e sequenciamento automtico. A dosagem da protena MBL no soro foi realizada pelo teste de ELISA. Verificamos que os fentipos MBL dependem do conjunto de alelos presentes no gene MBL2, sendo ntido o efeito que as variantes defectivas causam nos nveis da protena. No encontramos diferena significativa entre casos e controles em relao distribuio dos gentipos MBL2 e dos nveis sricos de MBL. As frequncias allicas das variantes exnicas na amostra total mostram que o alelo A o mais comum (74,8%) e que os alelos defectivos (B, C e D) se encontram principalmente em heterozigose (36,6%), o que refora a ideia de que alelos MBL2 defectivos so mantidos na populao por conferirem vantagem seletiva aos heterozigotos. Em relao aos 3 principais polimorfismos existentes na regio promotora, verificamos ser a variante -221G (Y) a mais frequente (88%) seguida de +4C (P) (73%) e de -550C (L) (67%). Identificamos oito hapltipos em MBL2 num total de 644 cromossomos avaliados, em 30 combinaes diferentes, sendo HYPA e LYQA os mais frequentes e HYPD e HYPB os mais raros. Todos os portadores de combinaes de hapltipos homozigotos para alelos defectivos apresentaram nveis sricos de MBL indetectveis. Os gentipos LYQA/LYQA e HYPA/HYPA apresentaram as maiores concentraes mdias de MBL no soro. A combinao entre SNPs no xon 1 e na regio promotora do gene MBL2 resulta em grande variao nas concentraes de MBL em indivduos saudveis. Consideramos que o conjunto de dados gerados uma contribuio valiosa que poder ser expandida para outros cenrios.
Resumo:
As baixas concentraes sricas de Lecitina Ligante de Manose (MBL) esto associadas com a presena das variantes allicas Mbl-*B, Mbl-*C e Mbl-*D, e resultam em um aumento na susceptibilidade a infeces recorrentes. No presente estudo foi investigada a associao entre o polimorfismo no gene Mbl e a susceptibilidade infeco pelo HIV-1. Um fragmento de 349 pb do exon 1 do gene Mbl foi amplificado por PCR e, posteriormente, submetido anlise de restrio com as endonucleases BanI e MboII, para a identificao dos alelos. A avaliao de 145 pacientes soropositivos e de 99 controles mostrou a presena dos alelos Mbl-*A, Mbl-*B e Mbl-*D, cujas freqncias foram de 69%, 22% e 9% no grupo de pacientes e de 70,2%, 13,6% e 16,2% entre os controles. A anlise das freqncias genotpicas mostrou uma maior prevalncia dos gentipos com a variante allica Mbl-*B entre os pacientes soropositivos quando comparadas do grupo controle. Ademais, o gentipo B/B foi seis vezes mais freqente no grupo de pacientes infectados (<sup>2</sup>=4,042; p=0,044). A mdia da carga viral plasmtica foi menor nos pacientes HIV-1 soropositivos, portadores do alelo Mbl-*A, quando comparado aos pacientes soropositivos apresentando a variante allica Mbl-*B (5.821 cpias/mL x 52.253 cpias/mL; p= 0,05). Ademais os pacientes portadores do alelo Mbl-*A apresentaram uma significativa reduo da viremia plasmtica (p<0,001), o que no foi observado para os portadores da variante Mbl-*B (p=0,999). Esses resultados sugerem a importncia do polimorfismo no gene Mbl na evoluo clnica do paciente infectado pelo HIV-1 e que a identificao do perfil gentico do gene Mbl, em portadores da infeco pelo HIV-1, pode ser importante na avaliao da evoluo e do prognstico da doena.
Resumo:
Neste estudo analisamos a freqncia de polimorfismos no xon 1 do gene 2 da lectina Ligadora de manose (MBL) em indivduos expostos malria causada por Plasmodium vivax. Foram analisadas amostras de 81 indivduos primoinfectados e 250 no infectados. Os indivduos no infectados constituram dois grupos, um que relatou nunca ter tido malria e o outro que teve de 1 a 4 ou mais episdios da doena. No grupo infectado, foi investigada a associao entre os polimorfismos e a suscetibilidade infeco, a intensidade dos sinais e sintomas clnicos e a parasitemia. As mutaes foram identificadas por reao em cadeia da polimerase e anlise de restrio. O grupo infectado apresentou distribuio de freqncias allicas e genotpicas diferente do grupo no infectado. As freqncias dos alelos MBL*A, MBL*B, MBL*C e MBL*D nos indivduos infectados foram 64,20%, 19,75%, 0,00% e 15,43%, nos no infectados que nunca tiveram malria as freqncias foram 72,96%, 14,80%, 3,06% e 9,18%, e nos no infectados que relataram episdio prvio de malria as freqncias foram 74,67%, 14,81%, 2,30% e 8,22%, respectivamente. O alelo MBL*B foi associado sintomatologia intensa e ao aumento na parasitemia, enquanto o alelo MBL*D foi associado s parasitemias mais baixas. No grupo no infectado, a distribuio das freqncias allicas e genotpicas variou com o nmero de episdios e o tempo decorrido aps o ltimo episdio de malria. As variantes MBL*B e MBL*D contriburam para essa variao. Esse foi o primeiro estudo para avaliar o impacto desses polimorfismos do gene da lectina ligadora de manose na resposta imune inata em indivduos expostos naturalmente malria causada por Plasmodium vivax.
Resumo:
A lectina ligante de manose (MBL) uma protena considerada de fase aguda com importante papel na primeira linha de defesa do sistema imune inato, cujos nveis sricos so determinados geneticamente. A MBL ativa a via da lectina do complemento, alm de mediar a opsonizao e fagocitose de microrganismos. Vrios estudos associam os nveis sricos de MBL suscetibilidade ou resistncia a agentes infecciosos entre eles o Mycobacterium tuberculosis, agente causador da tuberculose humana. Neste estudo, com o objetivo de avaliar a ocorrncia de uma possvel associao entre os polimorfismos e a tuberculose, avaliamos as freqncias das mutaes no xon 1 do gene MBL em um grupo de 167 pacientes com tuberculose, subdivididos em 3 grupos: pacientes com tuberculose pulmonar, pacientes com tuberculose extrapulmonar, pacientes com tuberculose multirresistente a drogas, e grupo controle com 159 profissionais da sade, negativos para tuberculose. A identificao dos alelos MBL *A, *B, *C e *D foi realizada por meio da reao em cadeia da polimerase, utilizando seqncias de iniciadores especficos e posterior digesto enzimtica. As anlises das freqncias allicas e genotpicas do xon 1 no mostraram qualquer diferena significativa entre pacientes com tuberculose e grupo controle (p>0,05). No foram observadas associaes significativas entre os grupos de tuberculose pulmonar, extrapulmonar e tuberculose multirresistente a drogas, quando relacionados entre si e ao grupo controle. Os dados obtidos em nosso estudo no demonstraram evidencias de qualquer influncia das variaes do xon 1 do gene MBL na tuberculose ativa, sugerindo que os polimorfismos nessa regio do gene no tem nenhuma influencia na susceptibilidade tuberculose.
Resumo:
Um emergente interesse MBL tem surgido, devido a sua importncia no sistema imune inato. Recentes estudos relatam uma influncia do polimorfismo na regio promotora nas regies -550 (H/L) e -221 (X/Y) do gene MBL, com a deficincia do sistema imune determinados patgenos. O objetivo do presente estudo investigar a associao entre o polimorfismo na regio promotora do gene MBL e a infeco pelo HIV-1e a progresso SIDA/AIDS. No estudo foi feita identificao destes alelos em uma populao de 127 pacientes soropositivos para HIV-1 e em 97 indivduos soronegativos, a partir da tcnica de SSP-PCR, utilizando-se seqncias de iniciadores especficos para cada variante. A evoluo da infeco nos pacientes soropositivos foi avaliada por meio da contagem de linfcito T CD4<sup>+</sup> e da carga viral plasmtica. As distribuies nas freqncias allicas e haplotpicas entre os grupos de portadores do HIV-1 e nos controles soronegativos no apresentaram diferenas estatisticamente significantes (p>0,05). Entretanto, pacientes soropostivos portadores do hapltipo HY apresentaram uma maior contagem e uma evoluo significativa no nmero de linfcitos T CD4<sup>+</sup>; e uma menor contagem e maior reduo da carga viral plasmtica, em relao aos pacientes portadores dos hapltipos LY, LX e HX. Os resultados do presente estudo mostram que a presena de hapltipos relacionados a mdios e baixos nveis sricos de MBL podem ter um papel direto na forma como o paciente soropositivo evolui laboratorialmente. Desse modo, conclui-se que a caracterizao dos hapltipos da regio promotora do gene MBL em portadores da infeco pelo HIV-1 pode ser importante na avaliao do prognstico de evoluo da SIDA/AIDS.
Resumo:
Ps-graduao em Biofsica Molecular - IBILCE
Resumo:
Coordenao de Aperfeioamento de Pessoal de Nvel Superior (CAPES)
Resumo:
Corynebacterium diphtheriae pode ser isolado tanto de quadros de difteria clssica, quanto de infeces sistmicas, como endocardite. O fibrinognio (Fbn) e a fibronectina (Fn) so glicoprotenas presentes na matriz extracelular de tecidos conjuntivos. A influncia destas protenas na patognese das infeces locais e invasivas causadas por C. diphtheriae objeto de estudo devido ao fato do bacilo diftrico poder ser encontrado em leses nas quais o Fbn e a Fn so predominantes, incluindo a pseudomembrana diftrica e vegetaes cardacas presentes na endocardite infecciosa. So crescentes as evidncias de que o C. diphtheriae pode, alm de aderir, ser internalizado por clulas em cultura. No presente estudo, investigou-se a participao de C. diphtheriae e das protenas de superfcie 67-72p na aderncia Fn e ao Fbn de plasma humano e a eritrcitos. A aderncia s clulas HEp-2 e internalizao tambm foram analisadas. A participao de 67-72p nos mecanismos de morte celular foi avaliada atravs das coloraes por Azul de Tripan e 46-diamidino-2-fenil indol (DAPI), pelo ensaio de reduo utilizando dimetil-tiazol-difenil tetrazlio (MTT) e por citometria de fluxo. As 67-72p foram extradas da superfcie da amostra toxignica C. diphtheriae subsp. mitis CDC-E8392 atravs de processos mecnicos e precipitao com sulfato de amnio saturado. Anlises por SDS-PAGE e immunoblotting detectaram a presena das bandas proticas de 67 e 72kDa nas amostras toxinognicas e atoxinognicas analisadas, as quais pertenciam aos biotipos fermentador e no fermentador de sacarose. C. diphtheriae foi capazes no s de formar agregados na presena de plasma de coelho, mas tambm de converter Fbn em fibrina independentemente da presena do gene tox. No entanto, a amostra atoxinognica ATCC 27010 (tox-) foi menos aderente ao Fbn do que a homloga ATCC 27012 (tox+). A interao bacteriana com eritrcitos foi inibida somente pela Fn. Ligaes entre Fn e/ou Fbn com 67-72p foram demonstradas por dot blotting, ELISA e/ou ensaios utilizando fluorescncia. As 67-72p foram capazes de inibir as interaes bacterianas com o Fbn, indicando que 67-72p podem participar do processo de aderncia do patgeno aos tecidos do hospedeiro. Atravs da microscopia ptica, demonstrou-se a ligação de 67-72p adsorvidas em microesferas de ltex com clulas HEp-2. Anticorpos de coelho do tipo IgG anti 67-72p interferiram somente com a expresso do padro de aderncia do tipo difuso, normalmente apresentado pela amostra CDC-E8392. A Microscopia Eletrnica de Transmisso (MET) e a inibio da internalizao bacteriana pela IgG anti 67-72p ou por 67-72p indicaram o papel de 67-72p como invasina. Alteraes do citoesqueleto de clulas HEp-2 com acumulao de actina polimerizada, induzida por microesferas sensibilizadas com 67-72p, foi observada pelo fluorescent actin staining (FAS) test. Foi visualizado um aumento no nmero de bactrias viveis no compartimento intracelular aps tratamento de clulas HEp-2 ou dos microrganismos com Fn. A presena de partculas de ltex adsorvidas com 67-72p no interior de vacolos frouxos em clulas HEp-2 sugeriu que estas protenas podem causar efeito citotxico. A avaliao atravs das coloraes com Azul de Tripan, DAPI e os ensaios de reduo utilizando MTT demonstraram um decrscimo na viabilidade de clulas tratadas com 67-72p. As mudanas morfolgicas observadas 3 horas aps o incio do tratamento com 67-72p incluram vacuolizao, fragmentao nuclear e formao de corpsculos apoptticos. A citometria de fluxo revelou um decrscimo de 15,13% no volume/tamanho de clulas tratadas com 67-72p. Alm disso, o ensaio utilizando Iodeto de Propdio (IP) e Anexina V (AV)-FITIC demonstrou que havia 66,1% de clulas vivas (IP-/AV-), 16,6% de clulas em apoptose inicial (IP-/AV+) e 13,8% de clulas em apoptose tardia ou necrose secundria. Em concluso, as 67-72p esto diretamente envolvidas na interao com Fn e Fbn. As protenas no fimbriais 67-72p so hemaglutininas implicadas na aderncia a clulas respiratrias e na internalizao. Alm disso, estas protenas podem atuar como fatores de virulncia em potencial para induzir apoptose de clulas epiteliais nos estgios iniciais da difteria e nas infeces invasivas causadas pelo C. diphtheriae
Resumo:
ZnO films were fabricated on LiGaO2 (0 0 1), (10 0) and (0 10) planes by RF magnetron sputtering. The structural, morphological and optical properties of as-grown ZnO films were investigated by X-ray diffraction (XRD), atomic force microscopy (AFM), Raman spectra and photoluminescence (PL) spectra. It is found that the orientation of ZnO films is strongly dependent on the substrate plane. [0 0 0 11, [1 (1) over bar 00] and [11 (2) over bar0] oriented ZnO films are deposited on LiGaO2 (001), (100) and (010), respectively. AFM shows the (0001) ZnO film consists of well-aligned regular hexagonal grains. Raman spectra reveal a tensile stress in the (0 0 0 1) ZnO film and a compressive stress in (110 0) and (112 0) ZnO films. PL spectra of all ZnO films exhibit only a near-band-edge UV emission peak. (C) 2008 Elsevier B.V. All rights reserved.
Resumo:
2003
Resumo:
Este trabalho de investigao centra-se na importncia do conhecimento da inter (ligação) entre a Biblioteca Escolar/Centro de Recursos Educativos e o currculo. A problemtica da investigao lanada pela questo que constitui o ponto de partida deste trabalho: De que forma que a Biblioteca Escolar/Centro de Recursos Educativos interage com o Currculo como um recurso do processo de ensino-aprendizagem? Tendo como base esta problemtica, o corpo da dissertao constituda por duas panes. A primeira respeitante ao quadro terico e a segunda referente ao estudo emprico. No quadro terico procedemos a uma aproximao conceptual problemtica em estudo. Tecemos consideraes acerca da evoluo da biblioteca escolar, conhecendo igualmente os princpios e as formas de atuar do Programa Rede de Bibliotecas Escolares e a principal legislao sobre este assunto. Refletimos acerca do currculo do ensino pr-escolar e do 1 ciclo do ensino bsico, nveis com os quais realizmos a componente emprica do trabalho, identificando a Biblioteca Escolar/Centro de Recursos Educativos como constituindo um recurso fundamental no processo de ensino aprendizagem, no contexto da diferenciao curricular, chamando igualmente a ateno para a importncia das parcerias no mbito da articulao entre o ambiente educacional e o territrio. A dimenso emprica da pesquisa envolveu a conceo e a testagem de instrumentos de recolha de dados, nomeadamente a anlise documental, a observao direta em contexto de Biblioteca Escolar, a realizao de entrevistas semi-directivas e a aplicao de um inqurito por questionrio aos alunos do 1 ciclo do ensino bsico. O conhecimento produzido permitiu-nos responder problemtica objetivada no incio da investigao, evidenciando que a Biblioteca Escolar/Centro de Recursos Educativos interage com o Currculo como um recurso do processo de ensino aprendizagem, constituindo-se como um centro de motivao da comunidade educativa que potencia um conjunto de aprendizagens das quais se destacam a leitura e a escrita e as atividades de pesquisa, atravs da metodologia de projeto. A BE/CRE complementa e enriquece o trabalho da sala de aula, quer ao nvel das reas curriculares disciplinares, quer ao nvel das reas curriculares no disciplinares. Com base nas concluses resultantes da investigao emprica, terminmos com a formulao de algumas sugestes e recomendaes que a evoluo do estudo nos foi aconselhando. /ABSTRACT - This research work focuses the importance of the school library/educational resource centre and its connection with the school curriculum. The research was focussed on the following question: How can the school library/educational resource Centre interact with the curriculum as a teaching resource? Based on this question, the dissertation includes two distinctive parts. The former concerns the theoretical framework and the latter the empirical study case. As far as the theoretical framework is concerned, we have studied the conceptual facts and drew some major conclusions about the evolution of the school library, taking into account the rules and proceedings of the School Library Network Programme and the legislation on the issue. We went through the curriculum of the kindergarten and the primary school on which we developed our study case. The school library/educational resource centre was, therefore, identified as a fundamental resource in the learning/teaching process for the curricula differentiation. We also emphasized the importance of partnerships to enhance the articulation between the educational environment and school territory. The empirical research included both the conception and the testing of some important data collecting techniques, namely the documentary analysis, direct observation in a School Library, half-directed interviews and a questionnaire which was answered by primary school students. The knowledge acquired allowed us to find possible answers for the question we have asked at the beginning of our research. We can conclude that the School Library/Educational Resource Centre does interact with the curriculum as motivation to improve the process of learning, such as reading and writing, of the educational community. The project work also gains a new perspective as the school library/educational resource centre enriches and complements the classroom work both on the curriculum subjects and non- subject curricular areas. Based on the conclusions we drew from our study case, we make suggestions and recommendations for further research.
Resumo:
As galactomananas das infuses de caf apresentam atividade imunoestimuladora in vitro, sendo esta atividade semelhante das mananas acetiladas extradas de Aloe vera. As galactomananas presentes no resduo de caf tambm possuem atividade imunoestimuladora in vitro quando so parcialmente acetiladas. Como as galactomananas so o componente maioritrio do resduo de caf e como o caf um produto de largo consumo a nvel mundial, o reaproveitamento deste resduo como fonte de galactomananas com atividade imunoestimuladora deve ser considerado. Esta dissertao procura dar resposta a duas questes: 1. Quais so as estruturas das galactomananas responsveis pela atividade imunoestimuladora destes polissacardeos; e 2. Como que as galactomananas podem ser extradas quantitativamente do resduo de caf de modo a serem solveis em gua temperatura ambiente e, assim, poderem ser utilizadas como ingredientes alimentares com atividade imunoestimuladora. A questo 1 foi respondida pela caracterizao estrutural de quatro galactomananas, de trs origens: a) as galactomananas das infuses de caf e do resduo que apresentaram atividade imunoestimuladora; b) a galactomanana da goma de alfarroba (LBG), que no apresentou atividade imunoestimuladora; e c) a manana acetilada de Aloe vera, que apresentou atividade imunoestimuladora. Estes polissacardeos foram submetidos anlise de acares e de ligaes glicosdicas e a hidrlise por endo--D- (14)-mananase. Os fragmentos de oligossacardeos mais pequenos foram ainda analisados por espetrometria de massa por ionizao de electrospray e espetrometria de massa tandem. As galactomananas das infuses de caf, do resduo de caf e do Aloe vera apresentaram grau de ramificao e peso molecular semelhantes, enquanto as galactomananas da LBG apresentaram grau de ramificao e de polimerizao maiores. Todas as galactomananas apresentaram resduos de arabinose como ramificao. O grau de acetilao das galactomananas da LBG foi vestigial enquanto as galactomananas do Aloe vera apresentaram um grau de acetilao de 2,08; para as galactomananas do resduo de caf o grau de acetilao foi de 0,98 e para as infuses foi de 0,08. A localizao dos grupos acetilo foi irregular em todos os polmeros. Os resultados obtidos permitem inferir que baixos nveis de ramificao, cadeias pequenas e alguma acetilao parecem promover a atividade imunoestimuladora atribuda s galactomananas. Para responder questo 2, foi testada uma metodologia que envolveu a torra do resduo de caf a 160 C e a 220 C e a sua extrao com gua quente e com solues de 4 M NaOH temperatura de 20, 60 e 120 C. A torra do resduo a 160 C e a extrao sequencial permitiu extrair 56% das galactomananas presentes no resduo de caf e, simultaneamente, 54% das arabinogalactanas. As galactomananas mantiveram a sua estrutura caraterstica de polissacardeo acetilado composto por uma cadeira principal de resduos de manose em ligação -(14) e resduos de Gal e Ara nas cadeias laterais. A 220 C, as galactomananas foram parcialmente degradadas e o rendimento de extrao foi muito menor do que a 160 C. No entanto, mesmo a esta temperatura as galactomananas apresentaram resduos acetilados e a presena de pentoses nas cadeias laterais, o que permite inferir a elevada resistncia destes polissacardeos temperatura e aos reagentes alcalinos. De forma a melhor compreender a estabilidade trmica das galactomananas do resduo de caf e a influncia que a presena de arabinogalactanas pode ter na sua estabilidade, foi feita uma anlise termogravimtrica aos polissacardeos extrados do resduo de caf assim como a polissacardeos relacionados estruturalmente com estes, como a celulose, a galactomanana de LBG e a goma arbica, uma arabinogalactana. As galactomananas so termicamente estveis durante 3 h a 200 C, enquanto as arabinogalactanas so estveis a 180 C. De acordo com os perfis dos termogramas obtidos, e pelo clculo das energias de ativao da degradao trmica, o resduo de caf apresenta uma estabilidade trmica menor do que a galactomanana, possivelmente devido presena de arabinogalactanas. Apesar de no se ter verificado alteraes no termograma da galactomanana do caf submetida a um tratamento trmico de 200 C durante 3 h, verificam-se alteraes estruturais que envolvem a formao de novas ligaes glicosdicas, nomeadamente, a formao de resduos de manose ligados em O-2 e em O-6, reaes de transglicosilao, despolimerizao, formao de resduos de anidro-hexoses no terminal redutor e isomerizao manose-glucose. Estas alteraes promovem a solubilizao das galactomananas. Os resultados obtidos permitem propor que o resduo de caf possa ser submetido a uma torra seguida de extrao com reagentes alcalinos a quente para obteno das galactomananas com rendimentos elevados. Estes polissacardeos podem tornar-se solveis em gua aps tratamento trmico a 200 C, permitindo assim a sua utilizao em formulaes alimentares, nomeadamente, por preparao de compostos acetilados com baixos nveis de ramificao e cadeias pequenas de modo a promover a sua atividade imunoestimuladora.
Resumo:
Helicobacter pylori is a bacterial pathogen that affects more than half of the worlds population with gastro-intestinal diseases and is associated with gastric cancer. The cell surface of H. pylori is decorated with lipopolysaccharides (LPSs) composed of three distinct regions: a variable polysaccharide moiety (O-chain), a structurally conserved core oligosaccharide, and a lipid A region that anchors the LPS to the cell membrane. The O-chain of H. pylori LPS, exhibits unique oligosaccharide structures, such as Lewis (Le) antigens, similar to those present in the gastric mucosa and are involved in interactions with the host. Glucan, heptoglycan, and riban domains are present in the outer core region of some H. pylori LPSs. Amylose-like glycans and mannans are also constituents of some H. pylori strains, possibly co-expressed with LPSs. The complexity of H. pylori LPSs has hampered the establishment of accurate structure-function relationships in interactions with the host, and the design of carbohydrate-based therapeutics, such as vaccines. Carbohydrate microarrays are recent powerful and sensitive tools for studying carbohydrate antigens and, since their emergence, are providing insights into the function of carbohydrates and their involvement in pathogen-host interactions. The major goals of this thesis were the structural analysis of LPSs from H. pylori strains isolated from gastric biopsies of symptomatic Portuguese patients and the construction of a novel pathogen carbohydrate microarray of these LPSs (H. pylori LPS microarray) for interaction studies with proteins. LPSs were extracted from the cell surface of five H. pylori clinical isolates and one NCTC strain (26695) by phenol/water method, fractionated by size exclusion chromatography and analysed by gas chromatography coupled to mass spectrometry. The oligosaccharides released after mild acid treatment of the LPS were analysed by electrospray mass spectrometry. In addition to the conserved core oligosaccharide moieties, structural analyses revealed the presence of type-2 Lex and Ley antigens and N-acetyllactosamine (LacNAc) sequences, typically found in H. pylori strains. Also, the presence of O-6 linked glucose residues, particularly in LPSs from strains 2191 and NCTC 26695, pointed out to the expression of a 6-glucan. Other structural domains, namely ribans, composed of O-2 linked ribofuranose residues were observed in the LPS of most of H. pylori clinical isolates. For the LPS from strain 14382, large amounts of O-3 linked galactose units, pointing to the occurrence of a galactan, a domain recently identified in the LPS of another H. pylori strain. A particular feature to the LPSs from strains 2191 and CI-117 was the detection of large amounts of O-4 linked N-acetylglucosamine (GlcNAc) residues, suggesting the presence of chitin-like glycans, which to our knowledge have not been described for H. pylori strains. For the construction of the H. pylori LPS microarray, the structurally analysed LPSs, as well as LPS-derived oligosaccharide fractions, prepared as neoglycolipid (NGL) probes were noncovalently immobilized onto nitrocellulosecoated glass slides. These were printed together with NGLs of selected sequence defined oligosaccharides, bacterial LPSs and polysaccharides. The H. pylori LPS microarray was probed for recognition with carbohydratebinding proteins (CBPs) of known specificity. These included Le and blood group-related monoclonal antibodies (mAbs), plant lectins, a carbohydratebinding module (CBM) and the mammalian immune receptors DC-SIGN and Dectin-1. The analysis of these CBPs provided new information that complemented the structural analyses and was valuable in the quality control of the constructed microarray. Microarray analysis revealed the occurrence of type-2 Lex and Ley, but not type-1 Lea or Leb antigens, supporting the results obtained in the structural analysis. Furthermore, the H. pylori LPSs were recognised by DC-SIGN, a mammalian lectin known to interact with this bacterium through fucosylated Le epitopes expressed in its LPSs. The -fucose-specific lectin UEA-I, showed restricted binding to probes containing type-2 blood group H sequence and to the LPSs from strains CI-117 and 14382. The presence of H-type-2, as well Htype- 1 in the LPSs from these strains, was confirmed using specific mAbs. Although H-type-1 determinant has been reported for H. pylori LPSs, this is the first report of the presence of H-type-2 determinant. Microarray analysis also revealed that plant lectins known to bind 4-linked GlcNAc chitin oligosaccharide sequences bound H. pylori LPSs. STL, which exhibited restricted and strong binding to 4GlcNAc tri- and pentasaccharides, differentially recognised the LPS from the strain CI-117. The chitin sequences recognised in the LPS could be internal, as no binding was detected to this LPS with WGA, known to be specific for nonreducing terminal of 4GlcNAc sequence. Analyses of the H. pylori LPSs by SDS-PAGE and Western blot with STL provided further evidence for the presence of these novel domains in the O-chain region of this LPS. H. pylori LPS microarray was also applied to analysis of two human sera. The first was from a case infected with H. pylori (H. pylori+ CI-5) and the second was from a non-infected control.The analysis revealed a higher IgG-reactivity towards H. pylori LPSs in the H. pylori+ serum, than the control serum. A specific IgG response was observed to the LPS isolated from the CI-5 strain, which caused the infection. The present thesis has contributed to extension of current knowledge on chemical structures of LPS from H. pylori clinical isolates. Furthermore, the H. pylori LPS microarray constructed enabled the study of interactions with host proteins and showed promise as a tool in serological studies of H. pyloriinfected individuals. Thus, it is anticipated that the use of these complementary approaches may contribute to a better understanding of the molecular complexity of the LPSs and their role in pathogenesis.
Resumo:
Com a publicao do Decreto-Lei n. 232/2007, de 15 de Junho, a Avaliao Ambiental Estratgica (AAE) tornou-se um procedimento tcnico de carcter obrigatrio em Portugal. Pretende-se com este trabalho abordar esta temtica com o objectivo de verificar a melhor hiptese de traado para a ligação ferroviria de alta velocidade Faro-Huelva, atravs da comparao de dois mtodos de avaliao. A rea em estudo pertence Sotavento Algarvio, abrangendo os concelhos de Faro, Olho, S. B. de Alportel, Tavira, Alcoutim, Castro Marim e Vila Real de Santo Antnio. A metodologia utilizada ser a sobreposio de mapas (com recurso a Sistemas de Informao Geogrfica) e as matrizes de Leoplod, metodologias mais aplicadas a estudos de Avaliao Ambiental para o sector dos Transportes. A utilizao destas metodologias permitir averiguar qual a mais consistente para estes estudos de caso, facultando a informao de maior relevo aos decisores e s entidades. Verificou-se que a criao de uma linha ferroviria de Alta Velocidade no Algarve possvel, tendo em ateno os factores ambientais, de forma a minimizar o seu impacte. Pela anlise matricial, os principais impactes negativos derivados deste projecto so maioritariamente decorrentes da fase de construo, e associam-se ocupao e compactao dos solos de forma irrevogvel, afectando zonas edificadas e zonas agrcolas e florestais, ocupao de solos REN e RAN, Zonas de Especial Conservao. Os positivos decorrem essencialmente da fase de explorao, associados s vantagens da utilizao deste meio de transporte, como o caso do desenvolvimento econmico da regio e do pas, encurtando a distncia e o tempo entre a Algarve e Espanha, com ligação a toda a Europa.
Resumo:
Trabalho Final de Mestrado para obteno do grau de Mestre em Engenharia Civil
